細胞培養技術的廣泛應用讓一色桃子在线视频對生命的奧秘有了更深一步的理解，同時也為醫學研究和臨床治療提供了重要支持。無論是研究者還是醫生，對細胞培養技術的掌握都是至關重要的，它們將開啟更多關於生命的精彩探索之旅。讓一色桃子在线视频一起走進細胞的微觀世界，探尋其中的無限可能吧！

01 細胞複蘇和傳代 

1.1細胞複蘇

將凍存細胞從液氮中取出後，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入8ml預熱的1640wan全培養基，輕輕吹勻，離心，1000rpmX5min，棄上清液。加入8ml 1640培養基清洗，棄上清液。加入10ml 1640wan全培養基，輕輕吹打，接種於T25培養瓶中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

1.2 細胞傳代

細胞密度達到80%左右時去培養基，10ml PBS清洗1-2次。加入0.7-1ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，用力拍打瓶壁，間隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，50-70%的細胞脫落後，加入 2ml 以上wan全培養基中止消化；然後分瓶，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

02. 細胞凍存 

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10ml PBS清洗2次加入0.7-1ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，用力拍打瓶壁，間隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，50-70%的細胞脫落後，加入 2ml 以上wan全培養基中止消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養瓶，轉移至15ml離心管，1000rpmX5min，棄上清液。加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內，立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放入液氮中，可以保存三個月。

凍存液的配製：90%血清+10%DMSO ;DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

03.細胞培養注意事項 

（1）進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用。

②確定衣服的袖口已經卷起或者白大褂的袖口已經紮緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋鬆。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔淨的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔台麵。

（2）細胞汙染的預防

①實驗用品防止汙染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要chedi，各種溶液滅菌要仔細，並在無菌實驗檢測陰性後才能使用。操作室及剩餘的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

②操作過程防止汙染。

③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂後才能進入細胞間。

④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，隻要接觸過生物安全櫃之外的物品，必須及時對手套進行消毒。

⑤進入細胞培養間後關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全櫃的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把汙染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模汙染。

⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，並將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

⑦實驗操作時生物安全櫃的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區，以免造成不必要的汙染。

⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所汙染。

⑨不要從敞開的容器口上方經過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的汙染。

⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔淨或者無法確定潔淨的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最後用75%酒精清潔台麵。

（3）防止細胞交叉汙染

①在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，最好作上標記便於辨別。按順序進行操作，一次隻處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發生混亂。

②在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養基中汙染其他細胞。

③所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發生汙染可重新複蘇細胞，繼續培養。