免疫熒光（Immunofluorescence）通過特異性熒光抗體結合細胞內的生物靶標抗原，從而實現對靶標分子在細胞內的分布及定位分析。該方法可以對組織塊兒、培養細胞或單個細胞進行標記，用於分析蛋白、糖原、及生物/非生物小分子，與此同時，免疫熒光也可以DAPI、Hochest33342等其他非抗體熒光標記染料聯合使用。
　　
　　免疫熒光方法中的重要環節：
　　
　　1.冰凍切片製備：建議用新鮮組織，否則組織細胞內部結構破壞，易使抗原彌散。選用幹淨鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。
　　
　　2.組織切片固定：切好片風幹後立即用冰丙酮等固定液進行固定5-10min，尤其要較長時間保存的白片，一定要及時固定和適當保存。
　　
　　3.血清封閉：為防止內源性非特異性蛋白抗原的結合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗來源一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調整的，一般10-30min。
　　
　　4.一抗孵育條件：在免疫組化反應中重要，包括孵育時間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果佳；孵育時間：這與溫度、抗體濃度有關，一般37度1-2h，而4度過夜和從冰箱拿出後37度複溫45min。具體條件還要摸索。
　　
　　5.二抗孵育條件：二抗一般室溫或37度30min-1h，具體時間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應。但在免疫熒光中一色桃子在线视频一般先把二抗濃度和孵育時間先定下，然後去摸索一抗濃度和孵育時間。後，熒光素標記的二抗隨著保存時間的延長，可能後有大量的遊離熒光素殘留，需要注意配製時小包裝和並進行適當的離心。
　　
　　6.複染：目的是形成細胞輪廓，從而更好地對目標蛋白進行定位。一般常用DAPI複染。
　　
　　7.封片：為了長期保存，一色桃子在线视频一般用緩衝甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然後一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對麵的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發現液體接觸麵在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產生氣泡。
　　
　　 8.切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當地加強清洗（延長時間和增多次數）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min×3次，而一抗孵育後的清洗均為5次×5min。